黑茶是我国特种茶之一,具有较长时间渥堆发酵的加工工艺,在长时间的渥堆过程中,微生物参与茶叶内物质的转化,产生特殊色香味品质,同时,由于微生物的参与,黑茶产生了新的不同于普通茶叶的药理功能及保健功能。与其他种类的茶叶相比,对黑茶的研究较少。虽然近年来对黑茶研究逐渐增多,但黑茶产生功效的作用机理大多仍不明确,这严重阻碍了黑茶进一步发展及开发。 因此,本研究以茯砖茶、花砖茶、青砖茶、黑砖茶、六堡茶、普洱茶为材料,以沱茶、米砖茶为对比材料,以高通量药物筛选为手段对黑茶的抗代谢综合症、高胆固醇血症、抗炎、抗消化道肿瘤活性进行了系统的药理功能分析及评价;采用高速逆流色谱对黑茶的物质成分进行了分离研究以及采用高效薄层色谱对黑茶脂溶性色素以及茯砖茶金花脂溶性荧光物质进行了分析研究。

1.采用柱层析硅胶作为支持剂的部位分离法从茶叶的乙醇回流提取液中得到石油醚洗脱组分、氯仿洗脱组分、乙酸乙酯洗脱组分、乙醇洗脱组分;以热水回流提取方式得到水提取成分。高效薄层检测发现石油醚洗脱组分主要是类胡萝卜素物质;氯仿洗脱组分主要是色素类物质及茶碱;且黑茶的石油醚洗脱组分以及氯仿洗脱组分在366nm紫外光下有强荧光。高效液相色谱检测分析后发现黑茶中没食子酸的含量较高;在所有的黑茶中,普洱茶中没食子酸的含量最高;而红茶类的米砖茶中没食子酸的含量也较高。同时发现黑茶中茶碱的含量较高,花砖茶中茶碱的含量则是其他黑茶的4～10倍。

2.选择PPARd、PPARγ、FXR激活、FXR抑制、LXR共5种核受体模型评价黑茶组分的抗高脂血症、抗动脉粥样硬化、抗肥胖等代谢综合症的生理活性,结果表明: (1)茯砖茶对PPARγ受体模型以及PPARδ核受体模型具有较好的激活作用,对LXR激活模型、FXR激活模型的激活作用都较强,有望能够从茯砖茶中发现抗脂减肥、治疗动脉粥样硬化、以及治疗糖尿病等抗代谢综合症的药物;普洱茶对这几种模型的作用结果显示普洱茶可能具有良好的对糖及脂类代谢的双向调节作用。 (2)六堡茶对FXR受体抑制模型表现出较好的活性;普洱茶中的中高极性对FXR受体抑制模型的活性也较好;而青砖茶中低极性成分对FXR受体抑制模型具较好的活性。因此,六堡茶、普洱茶及青砖茶具有较好的FXR抑制剂的筛选前景。同时,黑茶的高极性物质对FXR受体抑制模型也具较好的活性。 (3)沱茶乙酸乙酯洗脱组分具有增加FXR受体抑制敏感性的作用,这一作用可能是由儿茶素表现的。 (4)沱茶的水提取成分对两种PPARs核受体模型几乎没有激活作用,而黑茶的水提取成分对于PPARs模型有较好的激活作用。这说明黑茶经过微生物发,酵之后,能够产生较多的易溶于水的抗脂减肥的生理活性成分。因此,直接饮用黑茶能够降脂减肥、防止动脉粥样硬化。

3.选择TNF、IL-1分泌细胞模型评价黑茶组分炕炎活性,黑茶组分对炎症分泌因子模型没有明显的抑制活性。

4.选择SGC-7901、HCT-8细胞株为模型评价黑茶组分对消化道肿瘤的抑制作用,结果显示黑茶对消化道肿瘤生长的抑制效果较好。黑茶的乙酸乙酯洗脱组分对消化道肿瘤的抑制作用较强。因此可使用乙酸乙酯洗脱的方式从黑茶中提取具有消化道肿瘤抑制作用的药物前提物。黑茶中对对消化道肿瘤细胞HCT-8起抑制作用的物质的极性要比对SGC-7901起抑制作用的物质的极性高。

5.金花对所选择的5种核受体模型都具有良好活性作用,实验结果表明金花中对核受体有作用的活性成分的极性跨度较大。对消化道肿瘤的抑制实验结果表明,金花同时具有很强的对消化道肿瘤的抑制作用。且低极性的金花氯仿洗脱组分的抑制活性要比中极性的金花乙酸乙酯洗脱组分的抑制活性更强,与黑茶中的物质相比,金花中起抑制作用的物质更倾向于低极性。对金花中脂溶性荧光物质进行检测时也发现其中有多种生理活性物质。对金花的生理功能评价的结果显示,金花是很值得进一步开发的抗代谢综合症、抗高脂血症、调节糖代谢的药物前体物,同时也是抗消化道肿瘤药物的前体物。

6.使用HSCCC分离黑茶中的物质成分。利用乙酸乙酯-水为溶剂系统,乙酸乙酯为流动相,可以一次性的将黑茶中将的茶碱、咖啡碱、没食子酸与儿茶素分离;茶碱、咖啡碱、没食子酸的纯度不低于99%。出峰顺序依次是ECG、EGCG、EC和DL-C、没食子酸、咖啡碱、茶碱。对黑茶水提取成分的分离中使用双向洗脱法,可缩短HSCCC分离时间,并且使出峰峰型较为尖锐。

7.在可见光下,色素在硅胶薄层板经石油醚:丙酮=7:3的展开剂展开后,清晰分离为9条色素带,按R_f值从大到小依次是β-胡萝卜素(β-Car,0.87,橙黄色)、未知色素(0.74,橙黄色)、脱镁叶绿素酸脂a(Poa,0.65,灰绿色)、脱镁叶绿素a(Pya,0.53,褐灰绿色)、脱镁叶绿素酸脂b(Pob,0.49,绿黄色)、脱镁叶绿素b及叶绿素酸脂a的混合色斑(Pyb/Cda,0.43,蓝绿色或黄绿色)、叶绿素酸脂b(Cdb,0.37,褐黄色)、叶绿素b及叶黄素(Chlb/Xan,0.35,绿黄色或土黄色)、新黄质(Neo,0.21,土黄色)。并且,在366 nm紫外光下,黑茶在R_f=0.70处有明显的荧光斑。从黑茶中分离出的色素的光谱吸收特征与文献上色素的光谱吸收特征差异较大:且不同黑茶中各色素的比例以及绝对含量上都有差异。

8.以脂溶性色素的含量为集群依据,采用SPSS软件对茶样进行聚类分析,集群分析树形图将两种绿茶(沱茶、炒青绿茶)归为一群,六堡茶单独成群,黑茶及米砖茶归为一类。其归类结果反映了不同茶类本身的色泽特征及茶叶相互之间的相似程度。

9.以HPTLC分析金花中的脂溶性荧光物质的光谱吸收特征,发现R_f=0.27处的条带在241 nm、288 nm、366 nm处有较强的紫外吸收,它的最大吸收峰出现在366 nm处;而R_f=0.58处的条带在241nm、290 nm处有较强的紫外吸收,它的最大吸收峰在290 nm处。同时以制备性薄层硅胶板对脂溶性荧光物质进行分离,以GS-MS联用分析,从金花中检测到下列物质:docosane、Hentriacontanc、Bis(2-ethylhexyl)phthalate、A-Neooleana-3(5),12-diene、Olean-12-ene、4,4,6a,6b,8a,11,11,14b-Octamethyl-1,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,14,14a,14b-octadecahydro-2H-picen-3-one、a-Neooleana-3,12-diene、10,13-Dimethyl-17-(1,4,5-trimethyl-hex-2-enyl)-1,2,9,10,11,12,13,15,16,17-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-one、Squalene、Friedelin。这些物质都是首次从金花中发现。（宋鲁彬）

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